REPOZITORIJ > REZULTATI

Povzetek

Humani biomonitoring je znanstvena metoda, ki nam omogoča, da ocenimo, ali so določene spojine iz okolja vstopile v naše telo, v kakšnem obsegu in kako se naša izpostavljenost tem spojinam spreminja skozi čas. Polibromirane difenil etre in Cr(VI) spojine smo v Evropski skupnosti zaradi njihove strupenosti ter pogoste pojavnosti v okolju uvrstili na prioritetni seznam Evropske iniciative za humani biomonitoring (HBM4EU). Za zanesljivo določitev omenjenih spojin v bioloških vzorcih in vzorcih iz okolja potrebujemo robustne analizne metode, ki morajo biti dovolj preproste in občutljive. Novo razvite metode pomembno prispevajo k novemu znanju o obnašanju preučevanih spojin v okolju in človeškem organizmu.
Polibromirani difenil etri so zaviralci gorenja, ki so dodani velikemu številu izdelkov široke potrošnje. Zaradi njihove obsežne uporabe v preteklosti so pogosto prisotni v okolju in živih organizmih, vključno s človekom. Večina analiznih postopkov za določitev polibromiranih difenil etrov v krvnem serumu zahteva velike količine vzorca. Del postopkov so zahtevne metode čiščenja ekstrakta, kjer se porabi velike količine organskih topil. V okviru doktorske naloge smo razvili zanesljivo, preprosto in občutljivo metodo za določitev šestih analogov PBDE v človeškem serumu z uporabo plinske kromatografije in masne spektrometrije z induktivno sklopljeno plazmo. Za ekstrakcijo PBDE iz 1 mL krvnega seruma smo uporabili 1 mL mravljinčne kisline in 30-minutno mehansko stresanje vzorca. Nato smo vzorcu dodali 2 ml izooktana ter ga mehansko stresali še dodatnih 30 minut. Ekstrakt smo očistili z uporabo kolon, polnjenih s Florisilom. Točnost analiznega postopka smo preverili z analizo standardnega referenčnega materiala SRM 1957 (ne-obogateni humani serum) in SRM 1958 (obogateni humani serum). Rezultati so pokazali, da je analizen postopek točen, ponovljiv in obnovljiv. Meje detekcije analiziranih spojin so bile med 0.0016 in 0.0039 ng mL-1. Metodo smo uporabili za analizo realnih vzorcev seruma. Izmerjene koncentracije PBDE so bile v enakem velikostnem razredu kot v nekaterih drugih evropskih državah.
V preteklosti so raziskovalci že preučevali transport in interakcije kromovih zvrsti v človeški krvi. Malo pa je študij, ki so se ukvarjale s kromovo speciacijo v človeškem serumu. Da bi preučili kinetiko interakcij Cr(VI) in Cr(III) spojin v človeškem serumu in določili koncentracije posameznih kromovih zvrsti na fizioloških nivojih, smo razvili novo analizno metodo, ki temelji na uporabi monolitske kromatografije, sklopljene z UV in ICP-MS detektorjema. Cr(VI), Cr-transferin (Cr-Tf) in Cr-albumin (Cr-HSA) smo ločili na CIM dietilamino (DEAE) koloni z uporabo linearnega gradientnega spiranja kolone od 100 % pufra A (50 mM Tris-HCl + 10 mM NaHCO3, pH 7.4) do 60 % pufra B (Pufer A + 2 M NH4Cl) v 10 minutah pri pretoku 1 mL min-1. Kromove zvrsti so se na koloni ločile z izkoristkom, ki je bil blizu 100 %, ponovljivost metode pa je bila sprejemljiva z RSD pod 8 %. Kinetiko interakcij Cr(VI) in Cr(III) v serumu smo spremljali v časovnem intervalu od 5 minut do 48 ur po dodatku obogatenih izotopskih sledilcev 50Cr(VI) in 53Cr(III). Rezultati so pokazali, da se 53Cr(III) hitro veže na Tf, medtem ko je redukcija 50Cr(VI) počasna. Po 48 urah je bilo več kot 90 % dodanega 53Cr(III) vezanega na Tf, preostalih 10 % pa na albumin. 20 % dodanega 50Cr(VI) je bilo še vedno prisotnega v serumu, preostali reducirani 50Cr(III) pa je bil v večini vezan na Tf. Visoka občutljivost razvite analizne metode je omogočila detekcijo kompleksa Cr-Tf na fizioloških koncentracijskih nivojih.